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Jun 28, 2023

Otimizando a Homogeneização de Amostras

Pesquisadores de diversas áreas precisam extrair moléculas de interesse de amostras para análises posteriores. Um passo crítico e inicial no procedimento de isolamento é a homogeneização do tecido ou a ruptura celular,

Pesquisadores de diversas áreas precisam extrair moléculas de interesse de amostras para análises posteriores. Um passo inicial crítico no procedimento de isolamento é a homogeneização do tecido ou ruptura celular, o processo no qual as células são lisadas para liberar analitos intracelulares, como ácidos nucleicos, proteínas ou metabólitos. Estas moléculas podem ser analisadas utilizando várias técnicas, incluindo PCR, NGS e western blot. Como todos esses métodos de análise dependem de uma preparação de amostras eficiente e reprodutível, a otimização desta etapa é uma prioridade.

A técnica de homogeneização mais tradicional envolve a pulverização mecânica de amostras de tecido com auxílio de almofariz e pilão. No entanto, este procedimento é demorado, trabalhoso e pode não ser ideal dependendo das propriedades físico-químicas da amostra.1 Métodos não mecânicos, incluindo lise química e sonicação, também podem homogeneizar amostras. No entanto, o calor gerado através da sonicação e dos detergentes utilizados na lise química pode ser agressivo para moléculas frágeis, como o ARN.1,2

Métodos mecânicos desenvolvidos mais recentemente reduzem o trabalho e o tempo necessários para a lise, bem como aumentam a eficiência da homogeneização. Por exemplo, a tecnologia de batimento de esferas 3D utiliza movimento de esferas rapidamente acelerado para triturar amostras de tecido.1 As esferas dentro dos tubos de lise são agitadas através de um movimento oscilante multidirecional. Além disso, uma grande variedade de kits de lise está disponível e oferece oportunidades para homogeneizar qualquer tipo de amostra biológica. Esses kits incluem tubos com volumes que variam de 0,3 a 15 mL, além de esferas compostas de cerâmica, vidro ou aço inoxidável, que variam em diâmetro.

Além dos desafios associados ao método de lise escolhido, as propriedades de uma amostra também podem dificultar a extração do analito. Algumas amostras produzem apenas uma pequena quantidade de analitos, como DNA de espermatozóides. Consequentemente, os pesquisadores precisam processar volumes maiores de amostras, que levam mais tempo para homogeneizar e podem exceder os limites máximos de volume do instrumento. Além disso, algumas amostras, como sementes, pele, osso ou tecido derivado de tumor, são difíceis de homogeneizar devido à sua dureza, elasticidade, mineralização ou natureza fibrosa.1,3–5 Agravando ainda mais o problema, amostras que são difíceis para lisar geram mais calor, levando à degradação ou desnaturação de alguns analitos termossensíveis.

O Precellys® Evolution Touch é um homogeneizador versátil da Bertin Technologies. Ele utiliza tecnologia de batimento de esferas, que é o padrão ouro para homogeneização de tecidos, para triturar até mesmo as amostras mais difíceis, como dentes e cabelos, em poucos minutos. É capaz de processar amostras de diversos tamanhos, pesos e volumes. Além disso, pode homogeneizar até vinte e quatro amostras simultaneamente. Como a simetria do instrumento permite que todos os tubos sigam o mesmo movimento, garante igual eficiência de homogeneização para cada amostra. O Precellys® Evolution Touch está equipado com uma tela sensível ao toque que responde mesmo quando o usuário está usando luvas. Além disso, os pesquisadores podem escolher entre trinta kits de lise diferentes projetados para homogeneizar amostras de diversas propriedades e volumes. Graças às velocidades de até 10.000 rpm, o calor mínimo é gerado através das amostras, garantindo assim a segurança dos analitos termossensíveis. Além disso, o instrumento é compatível com a unidade de resfriamento Cryolys Evolution, que permite manter a temperatura da amostra entre 0 e 10 °C antes e durante a homogeneização.

Com base na variedade de tamanhos de tubos aceitos, nas inúmeras opções de kits de lise e na capacidade de processar múltiplas amostras simultaneamente, o Precellys® Evolution Touch é um homogeneizador versátil e eficiente, adequado para muitos campos de pesquisa.

Referências